קוד CPT
L0564 , 88346
שם הבדיקה
פרוטאומיקה קלינית- איפיון עמילואידוזיס
שמות נוספים לבדיקה
לאבחנה/טיפול
עמילואידוזיס היא פתולוגיה שבה פיברילות לא מסיסות של חלבון שוקעות ברקמות ופוגעות בהן. ישנם כ40- סוגי חלבונים שיכולים לייצר פיברילות עמילואיד כאשר שלושת הסוגים הנפוצים הם: שרשראות אימונוגלובולינים קלות )קאפא או למבדה(, טרנסטירטין (prealbumin/Transthyretin( ו-SAA( A Amyloid Serum). המחלות מכונות בהתאמה, AL, ATTR ו-AA. עבור כל סוג חלבון עמילואידי ישנה קליניקה אופיינית, פרוגנוזה וטיפול שונה. ניתן לסווג כך: ATTR פוגע בלב ובעצבים, AA במעי, בכבד ובכליות ו-AL בשילוב כלשהוא של לב, כליות, כבד ועצבים. הפגיעה הלבבית היא קרדיומיופטיה רסטרקטיבית (cardiomyopathy Restrictive(, הפגיעה הכלייתית מתבטאת באי ספיקת כליות או תסמונת נפרוטית, ואילו הפגיעה העצבית מתייצגת כתסמונת התעלה הקרפלית, דיסאוטונומיה או נוירופתיה פריפרית. אבחון עמילואיד מתבצע בשני שלבים כאשר ראשית יש לזהות את משקעי העמילואיד ואז לאפיין את סוג החלבון הפתולוגי. זיהוי המשקעים מתבצע על ידי צביעת רקמה ב- red Congo שנותנת במיקרוסקופ מראה "ירוק תפוח" באור מקוטב, או על ידי זיהוי פיברילות במיקרוסקופ אלקטרונים. בארץ אפיון סוג העמילואיד עדיין מתבצע על-ידי צביעה אימונו-היסטוכימית או אימונו-פלורסנטית, אך שיטה זאת מוגבלת מבחינת הרגישות והסגוליות במקרי AL ואינה זמינה לאבחון סוגים נדירים של עמילואיד. מכיוון שכך, פותחה שיטה מתקדמת שבבסיסה חיתוך משקעי העמילואיד מתוך הרקמה תחת המיקרוסקופ באמצעות לייזר ואפיונם הפרוטאומי באמצעות spectrometry mass tandem. כיום שיטה זו היא standard gold באפיון עמילואיד
שיטת ביצוע הבדיקה
Laser microdissection and tandem Mass spectrometry הביופסיה נחתכת בעובי 10 מיקרון ומקובעת על סלייד ייעודי מסוג director. הסלייד נצבע ל-red Congo במכון הפתולוגי ומועבר למעבדה להמטולוגיה. במיקרוסקופ 6LMD של Leica מזוהים משקעי העמילואיד באור מקוטב ומסומנים לצורך חיתוך בלייזר, המשקעים נאספים במבחנות אפנדורף מתאימות המכילות בופר Zwittergent. לאחר מכן מתבצע מיצוי חלבונים בחום של 98 מעלות צלזיוס למשך 90 דקות, ולאחר מכן סוניקציה. החלבונים עוברים עיכול לפטטידים באמצעות טריפסין. הפפטידים
מנוקים על StageTips, מיובשים ומורחפים בתמיסה להרצה. הדגימות מוזרקות למערכת כרומטוגרפיה נוזלית בשילוב ספקטרומטר מסות ברזולוציה גבוהה והנתונים הגולמיים מעובדים בתוכנת Mascot על בסיס מספר מאגרי מידע להפקת רשימת חלבונים מזוהים.
מגבלות השיטה
15% excess tissue hinders interpertation, 0.2% dual types
